R zotavení

1. Vyjměte zmraženou zkumavku z kapalného dusíku a ihned ji vložte do vodní lázně o teplotě 37 °C za mírného protřepání. Po roztavení kapaliny (asi 1-1,5 minuty) vyjměte trochu alkoholu a položte jej na ultra čistý pracovní stůl.

2. Vezměte buněčnou suspenzi do 15ml centrifugační zkumavky s 10ml média (promyjte zmraženou zkumavku médiem a omyjte všechny buňky přilepené ke stěně) a centrifugujte při 1000 °C po dobu 5 minut.

3. Supernatant byl obrácen a byl přidán 1 ml média pro suspendování buněk. Vykuřte do misky o průměru 10 cm s 10 ml média a jemně protřepejte doleva a doprava, aby se buňky v misce rovnoměrně rozmístily.

4. Označte typ buňky a datum, lidské jméno atd., vložte ji do CO2 inkubátoru, nalepte buňky a vyměňte médium.

5. Médium bylo měněno jednou za 3 dny.

P assáž

1. Rostliny byly pasážovány, aby bylo dosaženo 80-90% pokrytí.

2. Aup původní médium .

3. Přidejte příslušný trypsin (buňky pouze zakryjte) a trávte 1-2 minuty .

4. Štěpení bylo ukončeno přidáním stejného objemu média obsahujícího sérum .

5. Profoukněte buňky pipetovací pistolí a nechte je všechny zavěšené.

6. Buňky byly odsáty do 15ml centrifugační zkumavky a centrifugovány při 1000 °C po dobu 5 minut.

7. Nalijte supernatant a přidejte 1-2 ml média, abyste vyfoukli všechny buňky.

8. Buňky byly přeneseny do několika kultivačních misek v závislosti na druhu buněk. Obecně se rakovinné buňky dělí na 5 buněk a přenášejí se tři normální buňky. Pokračujte v kultivaci.

Volně trávit buňky a centrifugovat je (tamtéž výše).

Suspendujte buňky odpovídajícím zmrazeným skladovacím roztokem, rozdělte je do sterilizované mrazicí zkumavky, nechte několik minut odpočívat a specifikujte typ buněk a datum zmrazení. poté uchovávány v perfuzi kapalným dusíkem.

Příprava kryokonzervačního roztoku: 70 % médium 20 % FBS 10 % DMSO. DMSO by měl být přidáván pomalu a neustále třepán.